TEST DE HOWELL

 Introducción

El test de Howell es la prueba que mide el tiempo que tarda en coagularse un PRP, obtenido a partir de una muestra de sangre anticoagulada con citrato, cuando se vuelve a recalcificar.

Metódica

Fundamento

Para llevarlo a cabo, se vierte el PRP en un tubo de vidrio, se le añade una solución de cloruro cálcico y se incuba la mezcla a 37 ºC.

El resultado del test de Howell es el tiempo transcurrido desde la adición del CaCl2 al PRP hasta la coagulación de éste.

Material necesario

§ Un rotulador de vidrio.

§ 2 tubos de hemólisis de vidrio.

§ 4 pipetas graduadas de vidrio de 0,1 ml.

§ Un baño de agua ajustable a 37 ºC.

§ Cronómetros.

Reactivos

§ Una solución acuosa de cloruro sódico a una concentración del 0,85 % p/v (solución salina al 0,85 %).

§ Una solución de cloruro cálcico 0,025 M.

Ésta puede ser preparada de la siguiente forma: CaCl2anhidro..0,28 g.

Agua destilada… 100 ml.

Pero también puede ser adquirida como reactivo comercial como, por ejemplo, el HEMOS PTT Cloruro cálcico (0,02 M) ® distribuido por la Casa comercial RAL.

§ Un plasma control normal de procedencia comercial o un pool de PRP preparado en el laboratorio donde se realiza el análisis.

Muestra

Un plasma rico en plaquetas (PRP), preparado centrifugando la sangre problema (debidamente anticoagulada con citrato trisódico) a unas 1.000 r. p. m., durante 10 minutos.

Técnica

1. Atemperar los reactivos y la muestra, a 37 ºC. Para ello, deben situarse éstos en un baño de agua, ajustado a 37 ºC, durante 5 a 15 minutos.

2. Rotular un tubo de hemólisis con la letra M (de Muestra) y otro con la letra C (de Control).

3. Introducir los 2 tubos en el baño de agua, ajustado a 37 ºC.

4. Depositar 0,1 ml de muestra, en el tubo M, y 0,1 ml de control comercial o de pool de plasmas, en el tubo C.

5. Añadir 0,1 ml de solución salina al 0,85 % al contenido de cada uno de los tubos.

6. Agregar, a la mezcla anterior, 0,1 ml de CaCl2 0,025 M y, simultáneamente, poner en marcha los cronómetros.

7. Coger los tubos por su extremo superior y, sin sacarlos del baño de

agua, inclinarlos suavemente hacia delante y hacia detrás, a un ritmo de una inclinación por segundo.

8. Parar el cronómetro correspondiente, cuando se vea la aparición de un enturbiamiento y de una solidificación de la mezcla de plasma y de reactivos, contenida en cada uno de los tubo