DETERMINACIÓN DE UN Du

OBJETIVO

 Determinar la presencia de un Du en la superficie eritrocitaria.

 FUNDAMENTO

 El Du es un antígeno D débil, que no suele dar la cara en pruebas normales para el Rh.

Primero, sensibilizaremos los hematíes problema con un suero con anticuerpos anti-D.

Segundo, Los enfrentaremos al suero de Coombs.Si existe el antígeno Du en la superficie de los eritrocitos, se producirá la unión de los anticuerpos anti-D a sus receptores de membrana.

Esto dará lugar a la aglutinación en presencia del suero Coombs, en una segunda fase.

MATERIALES

Tubos de ensayo                                                                

Centrifuga                                                                         

Pipetas pasteur

Gradilla

Baño maría

Vaso de precipitados

Porta objetos

 REACTIVOS

Suero anti D humano                                   

Suero de coombs

Suero fisiológico

MUESTRA

Hematíes de la sangre problema previamente lavados 3 veces en solución salina y suspendido al 5%

 TÉCNICA

 

1. Realizamos la prueba Rh en porta de la muestra buscando un Rh-

 

 

 2. Realizamos la suspensión de hematíes al 5%

 

 

 

3. Echamos en un tubo de ensayo una gota de suero anti D y una gota de la suspensión al 5%

 4. Mezclamos suavemente e incubamos a 37ºC durante 30 minutos

 

 

 5. Después de incubar, lavamos los hematíes en solución salina 3 veces. Para ello, añadimos 1 ml de suero fisiológico y centrifugamos a 1000 rpm 1 minuto en cada lavado.

 6. Decantamos la solución salina en el último lavado

 7. Añadimos sobre el sedimento una gota de suero de Coombs y mezclamos suavemente.

 8. Centrifugamos durante 1 minuto a 1000 rpm.

 

 RESULTADOS

 Observamos si hay o no hay aglutinación, dando golpecitos suaves en el fondo del tubo.

 Si es +, hay antígeno Du en la membrana de los eritrocitos y se clasifica Rh+, variante Du.

Si es -, se clasifica como Rh-.

En el caso +, hay que realizar una prueba de Coombs directa, para confirmar el resultado.

 En mi muestra en la prueba del porta daba como positivo, sin embargo al realizar esta prueba el resultado finalmente dio negativo porque no se observaba aglutinación.

 VALORACIONES Y CONCLUSIONES

 Esta práctica fue interesante, ya que en mi caso era necesario realizar esta prueba para comprobar si realmente era negativo o positivo ya que en la primera prueba de porta el resultado era negativo pero según el informe el paciente era B+.