ESTUDIO DE LA FRAGILIDAD ÓSMOTICA DE LOS ERITROCITOS. ROE

 FUNDAMENTO:El estudio de la fragilidad osmótica de los hematíes valora la resistencia de los eritrocitos a soluciones de presión osmótica decreciente, en condiciones constantes de pH y de temperatura. Para ello, se enfrentan los hematíes problema a soluciones tamponadas de cloruro sódico cuya concentración es decreciente a partir de 9 gramos por mil (soluciones hipotónicas).

Cuando los eritrocitos están en contacto con soluciones hipotónicas, penetra agua a través de su membrana y se hinchan. Al hincharse los hematíes, una parte de la Hb que contienen puede salir al exterior a través de los poros de su membrana. Si la entrada de líquido es excesiva, los hematíes se rompen y dejan libre toda la Hb que engloban (hemólisis).

En condiciones normales, un eritrocito puede aceptar sin hemolizarse una entrada de agua que incremente su volumen en un 70 % como máximo.

Esta prueba evalúa por tanto la capacidad que tienen los glóbulos rojos de soportar un incremento de su contenido acuoso (resistencia osmótica eritrocitaria o ROE). Dentro de una misma sangre, la ROE de los hematíes varía de unos a otros.

MATERIALES: gradillas, cubeta de espectrofotómetro, tubos de hemolisis, pipetas y puntas de pipetas

REACTIVOS: suero con pH 7,4

-9g NaCl

- 2,7g Na2HPO4 2H20

-0,2g NaH2PO4 H20

-1000ml de agua destilada

TECNICA:

tubo Nº    1        3         5         7          9          11           13            15            17

AD         0       100     200      300    400        500          600          700          800

suero     900   800      700      600    500        400         300          200           100

( )          9       8           7          6        5             4              3             2               1

se le añade 50 ul (1 gota) de sangre a los tubos, se deja reposar 30 minutos y se van midiendo cada uno en el espectrofotómetro a 540nm

RESULTADOS:

                  Abs

1             2,747

3             2,740

5             2,752

7             2,768

9             2,845

11           2,759

13           2,700

15           2,675

17           2,689

 A = Absorbancia del líquido presente en el tubo analizado.

AM =Absorbancia del líquido contenido en el tubo nº 18 (Absorbancia máxima).

                                   A

% de hemólisis = ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ x 100        

                                AM

IMAGENES: