DETERMINACIÓN DE LA HEMOGLOBINA EN SANGRE

 TÍTULO: Determinación de la hemoglobina en sangre

FUNDAMENTO: Se basa en la transformación de la hemoglobina en CIANMETAHEMOGLOBINA, al añadir a la mues-tra de sangre ciertos componentes del reactivo de DRABKIN. En primer lugar, el Fe2+ se oxida a Fe3+, dando lugar a metahemoglobina. 

Luego, en presencia de cianuro potásico, pasa a cianmetahemoglobina, de color rojo y con un pico de absorción máximo a 540 nm y cuya concentración puede ser determinada por métodos colorimétricos, empleando un patrón de concentración conocida.

REACTIVOS: Reactivo de Drabkin formado por ferrocianuro potásico 0,6 mol/L, cianuro potásico 77 mol/L y di hidrógeno fosfato de potásico 2 mol/L (YA PREPARADO Y EN UN FRASCO OPACO)

MATERIALES:

7 tubos de ensayo

 Pipeta de 5ml

 Prepipeta

 Micropipeta

 Puntas de micropipeta

 Vaso de precipitado

 Parafilm

 Espectrofotómetro

Matraz aforado

TÉCNICA:

- Para la preparación del reactivo de Drabkin se siguen estos pasos:

1.  Se prepara 250 ml para que todos puedan utilizarlo.

2. Cogemos un matraz aforado y vertemos en él 1 frasco de 5 ml del reactivo y enrasamos con agua destilada (245 ml)

3. Tapamos con papel parafilm y mezclamos bien.

4. Trasvasamos la disolución a frascos de cristal oscuro, para su conservación y etiquetamos.

Luego se van a preparar unas diluciones seriadas con solución patrón del tal forma:

1. Partimos de 15 g/dl de solución patrón (150 g/L)

2. Hacemos la primera dilución 1/2: 7,5 g/dl (75 g/L) de patrón: 0,5 ml de solución patrón + 0,5 ml de agua destilada.

3. Hacemos la segunda dilución 1/4: 3,75 g/dl de patrón: 0,5 ml de la disolución 1/2 + 0,5 ml de agua destilada (375 g/L)

- Para realizar la técnica y la medida al espectrofotómetro:

1. Se enciende el espectrofotómetro  y se programa a 540 nm.

2. Preparamos los tubos de la siguiente manera:

 

incubando los tubos a temperatura ambiente unos 3 minutos, para proceder seguidamente a su medición

RESULTADOS:

blanco : 0

patrón: 1. 0,295  2. 0,124   3. 0,059

muestra: 0,481

CÁLCULOS :

P1: 15x0,295/0,481= 9,20

P2: 7,5x0,124/0,481= 1,93

P3: 3,75x0,059/0,481= 0,45

GRÁFICA EXCEL: