DETERMINACIÓN DEL HIERRO SÉRICO Y CFTH

 Título: determinación del Fe sérico y CTFH

DETERMINACIÓN DE FE SÉRICO

Fundamento: Se trata de un método colorimétrico de la casa Spinreact (se adjunta el protocolo) que utiliza como muestra PLASMA. Primero separa el hierro de la transferrina y a través del ácido ascórbico pasarlo a ión ferroso, que en presencia de Ferrozine forma un complejo coloreado cuya intensidad es proporcional a la concentración de hierro en la muestra.

El procedimiento que seguimos es primero el llenado de las cubetas (utilizar tubos después a cubetas) como se muestra en la tabla. A continuación se mezclan bien y se dejan incubar durante unos 10 minutos para por último medir su absorbancia en el espectrofotómetro. Para realizar los cálculos posteriores es importante saber que la concentración del patrón es de 100 µg/dl.

Reactivos:

 .  R1: Tampón Acetato pH 4,9 100mmol/L

· R2: Reductor Ácido ascórbico 99,7%

· R3: Color FerroZine 40mmol/L

· Patrón 100 microg/L

Para preparar el reactivo de trabajo (RT), disolvemos el contenido de un tubo de R2 en el de R1. Lo tapamos y movemos suavemente, hasta disolver el contenido.

Técnica:

Cubetas      Blanco RT         Patrón         Blanco Muestra          Muestra

RT (ml)        1,0                       1,0                   1,0                           1,0

R3 (gotas)      1                          1                     ---                             1

Agua destilada (µl) 200             ---                    ---                            ---

Patrón (µl)      ---                       200                  ---                            ---

Muestra (µl)    ---                       ----                  200                         200

. se mide en el espectrofotómetro a 562 nm ( solo del patrón y muestra frente al blanco RT)

Cálculos:

(A) muestra- (B) blanco muestra / (A) patrón X 100 : 107,14 ug/dl

CTFH

Fundamento: La transferrina sérica se satura con un exceso de Fe3+ y el exceso no fijado se elimina por precipitación con carbonato magnésico (quelante), determinándose a continuación la cantidad total de hierro presente. La diferencia entre la capacidad de fijación total de hierro hallada (CFTH) y el hierro sérico inicial (Hb) nos da la capacidad de fijación de hierro no saturado o residual.

Reactivos: 

REACTIVOS R5: Solución Saturante: Solución de hierro 500 μg/dL

R6 : Agente Precipitante:  Magnesio carbonato

Técnica:

1. Pipetear en los tubos: Muestra (mL) 0,5

R5 Solución saturante (mL) 1,0

2. Mezclar bien e incubar 10 minutos a Temperatura ambiente (15-25ºC).

3. Añadir a cada tubo: R6 Agente precipitante (dosis) 3 (cucharadas que vienen en envase)

4. Mezclar bien e incubar 10 minutos a temperatura ambiente.

5. Centrifugar 15 min. a 3000 r.p.m.

6. Recoger el SOBRENADANTE, cuidadosamente y procesar como una muestra para la determinación de hierro.

Cálculos: CFTH = Concentración de hierro en el sobrenadante x 3 (Factor de dilución)

IST (INDICE DE SATURACIÓN DE LA TRANSFERRINA) %:

IST= Hierro sérico x 100/CTFH