POOL DE PLASMA

 Introducción

El uso controles en las determinaciones analíticas constituye una herramienta imprescindible para vigilar el grado de variabilidad de las mismas y el nivel de deterioro de los reactivos empleados. Los laboratorios comerciales ofertan plasmas control que pueden ser utilizados, en las pruebas de coagulación de rutina, para realizar esta función (por ejemplo, el Plasma control normal de Wiener lab o el TriniCal Reference Plasma® de Tcoag). No obstante, en el propio laboratorio clínico se puede preparar un pool de plasmas normales con objeto de efectuar esta labor de control de la calidad analítica.

Fundamento

Un pool de plasmas normales es una mezcla de varios plasmas procedentes de sujetos sanos, que puede ser utilizada como líquido de referencia, ya que las sustancias que contiene están presentes en ella a una concentración comprendida dentro de los límites de la normalidad.

En la mayoría de las pruebas de coagulación se utiliza el plasma pobre en plaquetas (PPP) como muestra. Debido a ello, la preparación de un pool de plasmas pobres en plaquetas puede resultar muy útil en el control de calidad de la mayor parte de estas pruebas analíticas.

Material necesario

§ Tubos de recogida de sangre que estén fabricados con material plástico, que contengan el anticoagulante adecuado y que puedan ser depositados en el interior de una centrífuga.

§ Cumplen estas características, por ejemplo, los tubos de los sistemas Vacutainer® y Venoject® que están preparados para la obtención de plasma destinado a pruebas de coagulación (los de tapón azul).

§ Una centrífuga.

§ Una pipeta Pasteur de plástico.

§ Un vaso de precipitados de plástico y de 25 ml de capacidad.

§ Tubos Eppendorf para congelación de plasma.

§ Una pipeta automática.

§ Puntas de pipeta automática.

§ Un rotulador de vidrio de punta fina.

Reactivos

§ Anticoagulante.

Ya que el pool de plasmas se destina a estudios de coagulación, el anticoagulante que deben contener los tubos de recogida de sangre es citrato trisódico 0,11 M, y éste debe mezclarse con la sangre en una proporción de 1 a 9.

Muestra

§ Sangres venosas recientemente extraídas, adecuadamente anticoaguladas y procedentes de 6 a 10 personas que no reciban ninguna medicación y que no padezcan ninguna enfermedad.

§ Es de especial importancia el tener constancia de que las sangres no son positivas para HBsAg, HCV y HIV. Y, aún hecha esta comprobación, deben manejarse como si se tratara de material infectivo.

Técnica

1. Centrifugar todas las sangres a 3.000‐3.500 r. p. m. y durante 10 minutos.

2. Desechar los plasmas hemolizados, hiperlipémicos o hiperbilirrubinémicos.

3. Extraer, rápidamente, los plasmas considerados válidos y depositarlos en un solo vaso de precipitados.

4. Mezclar bien todos los plasmas para formar el pool de PPP.

5. Repartir un mismo volumen del pool de PPP (por ejemplo, 300 ml) en tubos Eppendorf, hasta agotar la mezcla de plasmas preparada.

6. Rotular en los tubos Eppendorf el nombre del producto que se ha preparado (pool de PPP) y la fecha de elaboración.

7. Proteger del deterioro al pool de PPP, mediante:

o Un cierre correcto de los tubos Eppendorf, para evitar la evaporación del agua que forma parte de la mezcla de plasmas y, por tanto, para eludir la hiperconcentración de las sustancias que ésta contiene.

o Una reducción de su exposición a la luz, para evitar la descomposición de alguna de las sustancias que incluye el pool.

o Una conservación a baja temperatura, para impedir la acción bacteriana que puede conducir a la alteración de alguna de las sustancias que engloba el pool.

o Esto último se realiza sometiéndolo a un proceso de congelación rápida mediante su exposición a una temperatura de –20 ºC. De esta manera el pool de PPP puede conservarse estable durante 28 días, aunque es preferible analizarlo en las dos semanas inmediatas a su congelación

Conclusiones y Observaciones:

 Al tener sangre de hace varios días cuando queremos recoger el plasma, no queda muy bien ya que suele estar hemolizado y algunas veces directamente no llega el tubo de plasma con citrato sódico.